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哪些因素影響了高保真DNA聚合酶的保真度？
2020-10-22 高保真DNA聚合酶的保真度是指準(zhǔn)確復(fù)制目的模板的結(jié)果。具體來說，這涉及到多個(gè)步驟，包括讀取模板鏈，選擇正確的三磷酸核苷，并將此核苷酸插入3’引物末端的能力。為了區(qū)分正確和錯(cuò)誤的核苷酸，一些DNA聚合酶具有3’到5’核酸外切酶活性。這種“校正”活性可切除不正確摻入的單核苷酸，并將其替換成正確的核苷酸。高保真PCR使用摻入錯(cuò)誤率低且具有校正活性的DNA聚合酶，以保證目的DNA的忠實(shí)復(fù)制。在設(shè)計(jì)PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，你首先要考慮你的應(yīng)用是否需要高保真聚合酶。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果依賴于正確的DNA序...
如何儲(chǔ)存和解凍胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
2020-08-24 胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。如何儲(chǔ)存和解凍胎牛血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋...
溶酶體染色試劑盒是一類熒光成像工具
2020-06-27 溶酶體染色試劑盒對(duì)于懸浮細(xì)胞，取10～60萬細(xì)胞，重懸于0.5mL細(xì)胞培養(yǎng)液中，細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅加入0.5mLJC-1染色工作液，顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中37℃孵育20分鐘。在孵育期間，按照每1mLJC-1染色緩沖液（5×）加入4mL蒸餾水的比例，配制適量的JC-1染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。37℃孵育結(jié)束后，600g4℃離心3～4分鐘，沉淀細(xì)胞。棄上清，注意盡量不要吸除細(xì)胞。溶酶體染色試劑盒是一類熒光成像工具，用來標(biāo)記亞細(xì)胞，細(xì)胞器；例如細(xì)胞膜、溶酶體、...
細(xì)胞培養(yǎng)中馬血清的作用有哪些
2020-06-19 馬血清采自健康馬血液為原料，封閉系統(tǒng)內(nèi)無菌采血，微孔過濾而成，性狀為澄清液體，無噬菌體、超低內(nèi)毒素，無溶血無異物無細(xì)菌真菌支原體霉形體衣原體等，促細(xì)胞生長繁殖效果佳，適用于細(xì)胞、組織器官培養(yǎng)、細(xì)胞株保藏、單抗研制，是醫(yī)院、科研院校、動(dòng)物疫苗、生物制藥廠家重要培養(yǎng)基之一。細(xì)胞在單純的培養(yǎng)基中不能存活，在特殊類型的細(xì)胞培養(yǎng)中必須提供某些營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子才能是細(xì)胞得以生長并維持生長狀態(tài)。基礎(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清，血清終濃度多為5－20％。特殊用途的血清來源需用經(jīng)驗(yàn)確定。廣泛應(yīng)用的...
說一說胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)研究中的重要作用
2020-05-18 胎牛血清采用心臟封閉穿刺的方法采自孕6～8月孕齡的健康母牛腹中的胎牛。通過生物材料合成吸附技術(shù)和低溫進(jìn)行前期處理，去除細(xì)菌、病毒、支原體、抗體等影響血清質(zhì)量的因素，然后再在凈化車間中進(jìn)行過濾分裝。胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。要說為什么很多細(xì)胞培養(yǎng)的科研人都用到胎牛血清，那就不得不說說胎牛血清那極為重要的作用。1.提供維持細(xì)...
ELISA常見的組織樣本制備方法
2020-05-15 為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃。我們提倡新鮮樣品應(yīng)盡早檢測(cè)，對(duì)收集后一周內(nèi)檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩Ｈ缬刑厥庠蛐枰芷谛允占瘶颖?，在取材后講標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差，蛋白容易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，故應(yīng)避免反復(fù)凍融。不同的樣本請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況處理。樣品制備方法1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再...
血清中的沉淀物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？
2020-04-26 細(xì)胞生長，我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因?yàn)樵谘迳a(chǎn)時(shí)后已經(jīng)經(jīng)過100nm或者40nm的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測(cè)，因此不推薦再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實(shí)驗(yàn)室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端。研究者可能會(huì)在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會(huì)比較警覺的去...
外泌體在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用與研究
2020-04-16 外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體*于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)...

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